僅供科研使用，不得用于臨床檢驗。

豬弓形蟲抗體（TOX）檢測試劑盒（ELISA）

說明書

貨號：INS0010002

    使用前，請務必仔細閱讀說明書，如有不清楚的，請撥打24h技術支持專線：0714-6338558或18171667592/18108699172，咨詢清楚再進行實驗。

黃石市艾恩斯生物科技有限公司

網址：www.inselisa.com

電話：0714-6338558

【產品名稱】

通用名稱：豬弓形蟲抗體檢測試劑盒（ELISA）

英文名稱：Test Kit for Antibodies to Porcine Toxoplasma Gondii（ELISA）

【包裝規格】

 48T/盒，96T/盒

【預期用途】

本試劑用于檢測豬血清中弓形蟲抗體，可用于豬弓形蟲抗體疫苗免疫效果評價。

【檢驗原理】

本試劑盒采用酶聯免疫吸附試驗（ELISA）。在預包被豬弓形蟲抗體抗原（固相抗原，貨號：INS0010002C）的微孔酶標板中，加入豬弓形蟲抗體陰陽性對照（貨號：INS0010002J）和待測樣本，溫育洗滌，再加入另一株HRP標記的酶標抗體（酶標抗體，貨號：INS0010002E），經過溫育與充分洗滌，去除未結合的組分，在微孔板固相表面形成固相抗原-抗體-酶標抗體的夾心復合物。加底物A和B，底物在HRP催化下，產生藍色產物，在終止液（2M 硫酸）作用下，最終轉化為黃色，在酶標儀上測定吸光度（OD值），吸光度（OD值）與待測樣品中豬弓形蟲抗體的濃度正相關，通過測定各反應孔中的吸光值，即可知樣品是否含有豬弓形蟲抗體。

【主要組成成分】

主要成分

陰陽性對照已經通過測試，由于不存在一種試驗方法能夠完全保證沒有這些物質，本品必須按照具有潛在的感染性進行處理，處理過程應當遵循通用的安全措施。

需要但未提供的材料及耗材

  1、酶標儀

2、精密移液器及一次性吸頭

3、蒸餾水

4、洗瓶或者自動洗板機

5、37℃水浴鍋或恒溫箱

6、500ml量筒

  無粉一次性乳膠手套

【儲存條件及有效期】

  1、2-8℃保存，切勿冷凍，有效期6個月。

  2、開封使用后，包被微孔板放入帶有干燥劑的自封袋中，密閉自封袋，并將全部試劑放回2-8℃冰箱。

  3、開封后，按照建議的條件保存，樣品稀釋液、包被微孔板和HRP標記抗體，有效期為28天，其他成分在標簽標明的有效期內是穩定的。

【適用儀器】

  半自動的酶標儀，如Thermo MK3，或者國產酶標儀。

【樣本要求】

  樣本類型和采集

以下只是列出樣品采集的一般指南。所有樣本采集過程中，不得使用疊氮鈉做為防腐劑。

     血清：使用不含熱原和內毒素的試管，操作過程中避免任何細胞刺激，4000rpm條件下離心20min，小心地分離出血清，保存在- 20℃以下，避免反復凍融。

     用樣品稀釋液將待檢血清按40倍稀釋（如5μl血清加入195μl樣品稀釋液中，混勻）。陰、陽性對照不用稀釋。

     濃縮洗滌液使用前應恢復至室溫使沉淀溶解，然后用蒸餾水或去離子水作20倍稀釋。

樣本保存和穩定性

樣本在2-8℃條件下，可以儲存72h，或者在- 20℃儲存6個月。樣本收集后，不是一次檢測完，請按一次用量分裝凍存，避免反復凍融，使用時在室溫下解凍，確保樣品均勻充分解凍。

【檢驗方法】

試劑準備

1、使用前，所有的組分都要至少復溫2h，確保充分復溫到室溫。

2、濃縮洗滌液：從冰箱取出的濃縮洗滌液，會有結晶產生，這屬于正常現象，水浴加熱使結晶完全溶解。濃縮洗滌液與蒸餾水，按1:20稀釋，即1份的濃縮洗滌液，添加19份的蒸餾水。

3、底物：底物液A和B，在使用前，按1:1體積充分混合，混合后10分鐘內使用。

操作程序

1、所有試劑和組分都先恢復到室溫，標準品、質控品和樣品，建議做復孔。

2、按前面試劑準備中描述的方法，配制好試劑盒各種組分的工作液。

3、從鋁箔袋中取出所需板條，剩余的板條用自封袋密封放回冰箱。

4、設置陰陽性對照孔、樣本孔，陰陽性對照孔各加對照品100μL，樣本孔加稀釋后樣本100μL。

5、用封板膜蓋住反應板，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育30min。

6、揭開封板膜，棄去液體，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液，靜置20s，甩去洗滌液，吸水紙上拍干，如此重復4次（共洗板5次）。若使用自動洗板機，請按洗板機操作程序進行洗板，添加浸泡20s的程序，可以提高檢測的精度。洗板結束，加底物前，要在干凈不掉屑的紙上，充分拍干反應板。

7、所有孔加入辣根過氧化物酶標記的檢測抗體100μL。

8、用封板膜蓋住反應板，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育30min。

8、揭開封板膜，棄去液體，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液，靜置20s，甩去洗滌液，吸水紙上拍干，如此重復4次（共洗板5次）。若使用自動洗板機，請按洗板機操作程序進行洗板，添加浸泡20s的程序，可以提高檢測的精度。洗板結束，加底物前，要在干凈不掉屑的紙上，充分拍干反應板。

9、將底物A和B按1:1體積充分混合，所有孔中加入底物混合液100μL。用封板膜蓋住反應板，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育10min。

   10、每孔加終止液50μl，混勻，于450nm(可用630nm作參比波長）測定各孔吸光值（A值），無參比波長用空白孔調零(即所有孔吸光值減去空白孔吸光值)。

【參考值】

實驗正常的情況下，陰性對照≤0.12，陽性對照≥0.58。

【檢驗結果的解釋】

1.樣品A值≥0.37為陽性；樣品A值在0.2到0.37之間為可疑；樣品A值＜0.2為陰性。

2.本實驗結果為陰性或可疑時表明豬只抗體水平不足，建議補打相應疫苗。

【檢驗方法的局限性】

1、僅供科研使用，不得用于臨床診斷。

2、在試劑盒標示的有效期內使用，過期產品不得使用。

3、跟其他廠家的試劑盒或者組分不能混用。

4、使用試劑盒配套的樣品稀釋液。

5、如果樣本值高于最高標準品濃度值，請將樣本適當稀釋后，再重新測定。

6、待測樣本中存在的人抗鼠等異嗜抗體會干擾檢測結果，檢測前，請排除該因素。

7、通過其他方法得到的檢測結果，與本試劑盒測定結果不具有直接的可比性。

【產品性能指標】

1、物理性能

試劑盒的各液體組分應澄清透明、無沉淀或者絮狀物。微孔板鋁箔袋應真空包裝，無破損漏氣。

2、陰性結果

陰性對照的OD值不高于0.12。

3、陽性結果

陽性對照的OD值不低于0.55。

4、特異性

本試劑盒識別天然和重組豬弓形蟲抗體，與結構類似物無交叉。

5、穩定性

2℃-8℃保存，有效期6個月。

包被板開封后請于2～8℃避光保存，使用期限為28天。

【注意事項】

生物安全

1、檢測必須符合實驗室管理規范的規定，嚴格防止交叉污染，所有樣品、洗棄液和各種廢棄物都應按照傳染物進行處置。

2、試劑盒的液體組分中，含有proclin-300防腐劑，可能引起皮膚過敏反應，避免吸入煙霧與皮膚接觸。

3、底物液對皮膚、眼睛和上呼吸道有刺激作用，避免吸入煙霧。戴上防護手套，實驗完成后徹底洗手。

技術提示

1、混合蛋白溶液時，避免起泡。

2、加校準品與樣本時，每個校準品濃度和樣本都要更換移液槍頭，公共組分應該懸臂加樣，避免交叉污染。

3、合適的溫育時間，和充分的洗滌步驟，是保證實驗結果準確性的必要條件。

4、底物溶液為無色液體，保存過程中變為藍色，代表底物溶液已經失效，不得使用。

5、終止液加樣順序與底物溶液加樣順序一致，加入終止液后，藍色底物產物，會瞬間變為黃色。

6、實驗中，用剩的板條，應立即放回自封袋中，密封（低溫干燥）保存。

7、所有液體組分，使用前充分搖勻，嚴格按照說明書標明的時間、加樣量及加樣順序進行溫育操作。

廢物處理

  所有使用或未使用的試劑，所有污染性的一次性材料，應當遵循傳染性或潛在傳染性產品的處理程序，每個實驗室都有責任根據其實驗的類型和危險性級別，進行廢物和污物的處理，同時要嚴格依照有關規定對待所有的廢物和污物。

【基本信息】

  企業名稱：黃石市艾恩斯生物科技有限公司

  生產地址：湖北省黃石市黃石港區磁湖路41號

  固定電話：0714-6338558

  網    址：www.inselisa.com

  郵    箱：postmaster@inselisa.com