GB/T 6682-1992

蜂蜜中羥甲基糠醛含量的液相色譜測定方法，檢出限1.0mg/kg，蜂蜜樣品中的羥甲基糠醛經HPLC反相色譜柱分離，用液相色譜儀紫外檢測器檢測，通過色譜軟件來收集圖譜、查看標準曲線外標法定量。本方法使用我公司STI501系列高效液相色譜儀系統來檢測，檢測精度滿足GB/T6682-1992要求。

1檢測條件  

   1.1甲醇:色譜純。

   1.2甲醇溶液:10%,吸取100ml,的甲醇到1000 ML的容量瓶中，用水稀釋至刻度。

   1.3標準物質:羥甲基糠醛純度≥99%,

   1.4標準儲備溶液:準確稱取適量的羥甲基糠醛標準物質于100mL容量瓶，用10ml,甲醇溶解，用水稀釋至刻度，配成0.20mg/mL的標準儲備液。此溶液可在溫度低于4℃冰箱中冷藏保存兩個月。

1.5標準工作溶液:分別吸取適量的羥甲基糠醛標準儲備溶液至100mL容量瓶中，用10%甲醇溶液釋稀至刻度，配成0.10ug/mL，0.20ug/mL，1.0ug/mL，2.0ug/mL，4.0ug/mL，6.0ug/mL，10ug/ml,標準工作溶液

   2儀器

2.1501高效液相色譜儀（杭州賽析科技）:配全波長紫外檢測器。

  恒流泵：耐壓42Mpa，流速精度0.001ml/min

  內置式專用色譜軟件，可做外標法，能兼容XP操作系統，RS-232接口

   2.2分析天平:感量0.01g,

   2.3注射器:10mL，微量進樣器

2.4過濾膜:0.45um，一次性針式過濾器

2.5 XO-80超聲波清洗器、FB-10T溶劑過濾器、AP-01真空泵

2.6色譜柱溫箱

   3試樣制備與保存

   3.1試樣的制備

       無論有無結晶的實驗室樣品，都不要加熱。將其攪拌均勻，分出0.5kg作為試樣。制備好的試樣置于樣品瓶中，密封，并做上標記。

   3.2試樣的保存

       將試樣于室溫下保存。

   4測定步驟

   4.1試樣處理

       稱取10g試樣，精確至0.01g，置于100mL燒杯中，加人10mL甲醇(1.2)，用玻璃棒輕輕攪拌均勻，使試樣完全溶解。轉移至l00mL容量瓶中，用水釋稀至刻度，充分混勻。用0.45u m的濾膜過濾，濾液用于液相色譜儀紫外檢測器測定。

   4.2色譜側定

   4.3液相色譜條件

       a)色譜柱:Vertex C18 5um,250mmX4.6 mm（i.d )或相當者（美國進口）;

       b)流動相:甲醇+水(10十90);

       c)流速:1.0 m L/min;

       d)檢測波長:285n m;

       e)柱溫:30度

       f)進樣量:10uL.

   4.4液相色譜測定

       首先測定七個標準工作溶液(1.5)在上述色譜條件下的峰面積，以峰面積對相應濃度繪制標準工作曲線，然后測定未知樣品，用標準工作曲線對樣品進行定量。樣品溶液中羥甲基糠醛的響應值應在儀器的線性范圍內。在上述色譜條件下，羥甲基糠醛的參考保留時間約為12 min。羥甲基糠醛標準物質色譜圖和含有短甲基糠醛的蜂蜜樣品色譜圖參見附錄A中圖A.1、圖A.2 ,

   4.5平行試驗

       按上述步驟，對同一試樣進行平行試驗測定。

   4.6空白試驗

       按上述步驟，對10%的甲醇溶液進行測定。

   4.7添加試驗

       每批樣品應至少進行一個樣品的添加試驗。稱取10g試樣，精確至0.0lg，添加1.0mL羥甲基糠醛標準儲備溶液，加9.9mL甲醇溶解，其他步驟按試樣處理步驟進行。

   5精度

      本部分的精密度數據是按照GB/T6379的規定確定的，其重復性和再現性的值是以95%的可信度來計算。

   本方法中經甲基糠醛添加濃度及其回收率的試驗數據:

   在添加量為1.0mg/kg時，平均回收率為93.78%;

   在添加量為10.0mg/kg時，平均回收率為94.88%;

   在添加量為40.0mg/kg時，平均回收率為95.76%;

   在添加量為100mg/kg時，平均回收率為94.68%.