快速熒光PCR是目前特異性和靈敏度較高的檢測技術。PCR技術實際上是一種分子生物學技術,通過放大特定的DNA或RNA(也可看作體外的特殊DNA復制),能快速得到患者體內病毒或細菌的含量,為疾病的診斷和治療及療效動態評估提供了有力的參考依據。它是通過熒光染料或熒光標記的特異性的探針,對PCR產物進行標記跟蹤,實時在線監控反應過程,結合相應的軟件可以對產物進行分析,計算待測樣品模板的初始濃度。
原理:
PCR擴增時在加入一對引物的同時加入一個特異性的熒光探針,該探針為一寡核苷酸,兩端分別標記一個報告熒光基團和一個淬滅熒光基團。探針完整時,報告基團發射的熒光信號被淬滅基團吸收;剛開始時,探針結合在DNA任意一條單鏈上;PCR擴增時,Taq酶的5'端-3'端外切酶活性將探針酶切降解,使報告熒光基團和淬滅熒光基團分離,從而熒光監測系統可接收到熒光信號,即每擴增一條DNA鏈,就有一個熒光分子形成,實現了熒光信號的累積與PCR產物形成完全同步。或者使用熒光染料。可以結合到雙鏈DNA上面,當體系中的模板被擴增時,可以有效結合到新合成的雙鏈上面,隨著PCR的進行,結合的染料越來越多,被儀器檢測到的熒光信號越來越強,從而達到定量的目的。
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