快速熒光PCR是目前特異性和靈敏度較高的檢測技術(shù)。PCR技術(shù)實(shí)際上是一種分子生物學(xué)技術(shù)，通過放大特定的DNA或RNA（也可看作體外的特殊DNA復(fù)制），能快速得到患者體內(nèi)病毒或細(xì)菌的含量，為疾病的診斷和治療及療效動(dòng)態(tài)評估提供了有力的參考依據(jù)。它是通過熒光染料或熒光標(biāo)記的特異性的探針，對PCR產(chǎn)物進(jìn)行標(biāo)記跟蹤，實(shí)時(shí)在線監(jiān)控反應(yīng)過程，結(jié)合相應(yīng)的軟件可以對產(chǎn)物進(jìn)行分析，計(jì)算待測樣品模板的初始濃度。
原理：
PCR擴(kuò)增時(shí)在加入一對引物的同時(shí)加入一個(gè)特異性的熒光探針，該探針為一寡核苷酸，兩端分別標(biāo)記一個(gè)報(bào)告熒光基團(tuán)和一個(gè)淬滅熒光基團(tuán)。探針完整時(shí)，報(bào)告基團(tuán)發(fā)射的熒光信號(hào)被淬滅基團(tuán)吸收；剛開始時(shí),探針結(jié)合在DNA任意一條單鏈上；PCR擴(kuò)增時(shí)，Taq酶的5'端-3'端外切酶活性將探針酶切降解，使報(bào)告熒光基團(tuán)和淬滅熒光基團(tuán)分離，從而熒光監(jiān)測系統(tǒng)可接收到熒光信號(hào)，即每擴(kuò)增一條DNA鏈，就有一個(gè)熒光分子形成，實(shí)現(xiàn)了熒光信號(hào)的累積與PCR產(chǎn)物形成完全同步。或者使用熒光染料。可以結(jié)合到雙鏈DNA上面，當(dāng)體系中的模板被擴(kuò)增時(shí)，可以有效結(jié)合到新合成的雙鏈上面，隨著PCR的進(jìn)行，結(jié)合的染料越來越多，被儀器檢測到的熒光信號(hào)越來越強(qiáng)，從而達(dá)到定量的目的。
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